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丁愛萍   謝良生   藍(lán)翠鈺   張艷春

（深圳市城管局園林科研所   518003）

摘要　以美人蕉莖尖為外植體進(jìn)行快速繁殖。在MS+2mg/l BA+0.2mg/l NAA的培養(yǎng)基上得到愈傷組織，該愈傷組織在MS+5mg/1BA+1mg/l NAA的培養(yǎng)基上分化出不定芽。在MS+5mg/l BA的培養(yǎng)基上，接種莖尖直接長(zhǎng)成無根新梢。在1/2MS+0.5mg/l NAA的培養(yǎng)基上，無根苗生根長(zhǎng)成完整植株。6～8cm高小苗可出瓶移栽，成活率為100%。

　　關(guān)鍵詞　美人蕉；莖尖培養(yǎng)；快速繁殖

　　美人蕉（Canna generalis Bailey）為我市主栽的行道花卉和花壇花卉之一，具有較強(qiáng)的觀賞性。但由于多年來一直采用分切根狀莖的方法進(jìn)行繁殖，出現(xiàn)病毒病害及品種退化問題。連續(xù)的營(yíng)養(yǎng)繁殖，使得病毒迅速傳播，病情逐年加重。而病毒病害是藥物防治不能消除的。采用現(xiàn)代生物技術(shù)方法對(duì)美人蕉進(jìn)行莖尖脫毒，再用組織培養(yǎng)法獲得無病毒種苗，進(jìn)一步建立無病毒種苗無性系并進(jìn)行快速繁殖，可迅速獲得大批量?jī)?yōu)質(zhì)、無病毒美人蕉種苗，從而，從根本上解決美人蕉花葉病問題。本文報(bào)道了美人蕉莖尖脫毒及建立美人蕉無病毒種苗無性系的研究結(jié)果。

1　材料與方法

1．1　材料

　　供試材料為大花美人蕉品種：深圳紅，深圳粉，優(yōu)麗，大金邊，鴛鴦，總統(tǒng)，金脈，阿旺，二喬，橘紅大花。

1.2　外植體處理

　　取帶芽胞的美人蕉根莖，常規(guī)消毒后用75%乙醇棉擦拭，再用0.1% HgCl2消毒10分鐘，無菌水沖洗5次。在超凈臺(tái)上，解剖鏡下剝?nèi)∏o尖，大小控制在0.5～1 mm，接種在培養(yǎng)基上。

1.3　培養(yǎng)基

　　脫分化培養(yǎng)基：MS+2 mg/l BA+0.2 mg/l NAA

　　分化培養(yǎng)基：MS+5 mg/l BA+1 mg/l NAA

　　直接生長(zhǎng)培養(yǎng)基：MS+5 mg/l BA

　　生根培養(yǎng)基：1/2MS+0.5 mg/l NAA

1．4　培養(yǎng)條件

　　培養(yǎng)溫度為28±2℃，光照強(qiáng)度為1500 Lux，每天光照10小時(shí)。

2　結(jié)果與分析

2．1　外植體接種污染率由50%降低到1～5%

　　由于所取外植體為生長(zhǎng)在土壤中的根莖，含有大量雜菌，很難消毒，采用封閉式振搖滅菌法[1]，使大批量接種的接種污染率降低到5%以下。

2．2　誘導(dǎo)脫分化并形成愈傷組織

　　在脫分化培養(yǎng)基上，經(jīng)30～40天培養(yǎng)有45～53%的外植體形成黃綠色形態(tài)較好的愈傷組織。供試的8個(gè)不同激素配比的培養(yǎng)基，其上接種的外植體，都或多或少地可產(chǎn)生愈傷組織，有的愈傷組織質(zhì)地較硬，有的較疏松，這些愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基后，都不分化不定芽。只有在脫分化培養(yǎng)基上產(chǎn)生的黃綠色的愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基后，才會(huì)分化出不定芽。

２．3　誘導(dǎo)愈傷組織分化不定芽

　　將脫分化培養(yǎng)基上產(chǎn)生的愈傷組織轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基上，經(jīng)約35天培養(yǎng)，大約80%的愈傷組織上可產(chǎn)生3～4個(gè)不定芽。

2．4　接種莖尖直接長(zhǎng)大，形成無根新梢

　　在MS+5 mg/l BA培養(yǎng)基上，有約50%的接種莖尖，經(jīng)40～50天培養(yǎng)，莖尖慢慢發(fā)育成芽。

2.5　不定芽擴(kuò)大繁殖

　　長(zhǎng)到2～3 cm高的不定芽，再轉(zhuǎn)到MS+5 mg/l BA的培養(yǎng)基上，經(jīng)30天培養(yǎng)，在每個(gè)芽的基部長(zhǎng)出3～4個(gè)側(cè)芽，這樣，每個(gè)繼代都以3～4倍的速度不斷擴(kuò)大繁殖。

2．6　形成完整植株

　　在繁殖過程中，將長(zhǎng)到3 cm左右的小苗轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上，經(jīng)15天培養(yǎng)，可在基部長(zhǎng)出3～4條根，這時(shí)即可出瓶移栽。

2．7　移栽成活

　　出瓶前，需打開瓶口，練苗2-3天，移栽時(shí)不可傷根。移栽的最佳溫度為18～25℃，移栽初期應(yīng)保持60%以上的相對(duì)濕度，并避免陽光直射，土壤使用普通園土即可。達(dá)到以上條件時(shí)，移栽苗成活率幾乎達(dá)到100%。

3　討論

　　美人蕉莖尖培養(yǎng)難度較大。首先。進(jìn)行莖尖脫毒，需取小于1 mm的莖尖，才能保證脫除CMV病毒，但小莖尖培養(yǎng)成活難度較大，關(guān)鍵技術(shù)是剝?nèi)∏o尖時(shí)勿使莖尖受傷褐化，操作速度又要快，勿使組織在空氣中暴露時(shí)間過長(zhǎng)。第二，莖尖培養(yǎng)成活后，誘導(dǎo)其分化出側(cè)芽，需較大量細(xì)胞分裂素，但同時(shí)細(xì)胞分裂素過量，就會(huì)產(chǎn)生玻璃苗。關(guān)鍵技術(shù)是，將培養(yǎng)基中BA控制在5 mg/l，即可保證小苗以3～4倍的速率擴(kuò)大繁殖，又可避免出現(xiàn)玻璃苗。第三，建立無病毒種苗無性系后要防止其老化，我們的經(jīng)驗(yàn)是2～3年進(jìn)行一次更新，以保持其較高的繁殖速率。

參考文獻(xiàn)

[1]   丁愛萍等.紅掌組織培養(yǎng)研究.中國(guó)花卉園藝，2003（5）：24-26.